肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y. C. Ma或德赢vwin登录 Cistanche tubulosa (Schenk) Wight干燥带鳞叶肉质茎^[1]。肉苁蓉主要活性成分为苯乙醇苷类^[2-4]，药理研究表明其具有壮阳、提高免疫力、增强记忆等功能^[4-9]。

近年来，响应面法得以在中药提取中得到广泛应用^[10-14]。响应面法具有检测精确度高、实验所需次数少、能准确预测函数模型、能反映因素和预测值之间关系等先天的优点^[15-17]。因此，本实验将5种苯乙醇苷类成分含量的综合评分作为响应值，使用Design-Expert 8.0.6.1软件设计实验，优化肉苁蓉的提取工艺，为肉苁蓉的鉴定和质量标准建立提供参考。

目前，指标性成分松果菊苷和毛蕊花糖苷为肉苁蓉提取、炮制工艺的研究热点，且《中国药典》2015年版规定肉苁蓉加工方法为“除去杂质，洗净，润透，切厚片，干燥”^[1]，对于干燥的方式没有明确规定。因此，本实验采用晒干、阴干、烘干（40、60、80、100、120 ℃）、冷冻干燥8种不同干燥方式对肉苁蓉进行炮制^[18]，为肉苁蓉干燥工艺提供理论指导。

1  材料与仪器

鲜品肉苁蓉采收于2018年10月，产地为甘肃省白银市民勤县糜滩乡，经甘肃农业大学郭晔红副教授鉴定为肉苁蓉Cistanche deserticola Y. C. Ma带鳞叶的肉质茎。对照品松果菊苷（批号82854-37-3，质量分数≥98%）、肉苁蓉苷A（批号93236-42-1，质量分数≥95%）、毛蕊花糖苷（批号61276-17-3，质量分数≥98%）、异毛蕊花糖苷（批号61303-13-7，质量分数≥98%）、2′-乙酰基毛蕊花糖苷（批号94492-24-7，质量分数≥95%）均购于成都普菲德生物技术有限公司；甲酸、甲醇为色谱纯，德国Merck公司；水为纯净水，其他试剂均为分析纯。

Waters Acquity液相色谱仪，PDA检测器，Empower色谱工作站及四元溶剂管理系统；KQ-100E超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；AL104分析天平，梅特勒-托利多仪器有限公司；LyoQuest-85冷冻干燥机，西班牙泰事达公司。

2  方法与结果

2.1  对照品溶液的制备

精密称定松果菊苷、肉苁蓉苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2′-乙酰基毛蕊花糖苷对照品适量，加70%甲醇制成质量浓度分别为1.04、0.61、0.63、0.39、0.48 mg/mL的混合对照品溶液。

2.2  肉苁蓉的色谱条件

Waters Symmetry C₁₈（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温30 ℃，体积流量1.0 mL/min；流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液，洗脱梯度：0～12 min，29%～34%甲醇；12～40 min，34%～40%甲醇；30～35 min，40%～35%甲醇；35～40 min，30%甲醇；检测波长330 nm（图1）。

2.3  供试品溶液的制备

精密称取1 g烘干的肉苁蓉粉末于三角烧瓶中（过65目筛），加50%甲醇50 mL，称质量，40 kHz超声150 W，冷却室温，补足质量，即得。

2.4  线性关系考察

取上述混合对照品溶液0.1、0.5、1、2、4、8mL置10 mL量瓶中，加70%甲醇至刻度。精密吸取10 μL，按“2.2”项色谱条件测定，质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归，得回归方程分别为松果菊苷Y＝128 049 X－830 189，r＝0.999 5，线性范围10.4～832.0 μg/mL；肉苁蓉苷A Y＝87 980 X－416 764，r＝0.999 9，线性范围6.1～488.0 μg/mL；毛蕊花糖苷Y＝92 831 X－447 963，  r＝0.9998，线性范围6.3～504.0 μg/mL；异毛蕊花糖苷Y＝92 831 X－447 963，r＝0.999 2，线性范围3.9～312 μg/mL；2′-乙酰基毛蕊花糖苷Y＝79 207 X－304 428，r＝0.999 4，线性范围4.8～384.0 μg/mL。

2.5  方法学考察

2.5.1  精密度考察  取“2.1”项混合对照品溶液20 μL，连续进样6次，测定松果菊苷、肉苁蓉苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2′-乙酰基毛蕊花糖苷峰面积，RSD分别为0.23%、0.71%、0.59%、0.41%、0.29%，表明仪器精密度良好。

2.5.2  重复性试验  取同一肉苁蓉样品6份，按“2.3”项制备供试品溶液，“2.2”项色谱条件进样，测定峰面积。结果松果菊苷、肉苁蓉苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2′-乙酰基毛蕊花糖苷质量分数的平均值分别为1.83%、0.21%、2.34%、0.13%、0.68%，RSD分别为1.32%、0.83%、1.24%、2.19%、0.78%，说明方法重复性较好。

2.5.3  稳定性试验  于0、2、4、8、12、24、48 h测定同一份供试品溶液（按“2.3<span style="margin: 0px; padding