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李媛，宋媛媛，褚春明，张洪泉”（扬州大学医药研究所，江苏扬州225001）
摘要：目的探讨肉苁蓉提取物松果药苷（BH）延线衰老的药理作用及其可能的作用机制，方法 小鼠皮下注射106 D-GAL 10 ml，W1每天1次，连续8周，建立亚急性表老模型，阳性组和BCH各组分别问时灌胃给 予维生素E40m KF1和ECH 20 40 60m kg1每天1次。检测小风抗应激绝力，血清中1-2 1-6含量以及脑组织中一氧化素（NOy．超氧化物歧化酶（SOD）和丙二経（MDA）含量。结果 与正常组比较，模型组小风抗应激烧力下降，血清L-2含量和脑组织N．SOD含量均显著下降，1-6和脑组织MDA含量显著升高。BCH各剂量组和维生素E阴性对照组均能提高衰老小鼠抗应激能力，血清L-2含量和脑组织N1 SOD含量，降低L-6和脑组织MDA含量，结论ECH能够提高衰老小鼠的免疫能力、NO含量，减轻D-GAL诱导衰老小鼠的活性氧自由基损伤，这些可能是其延缓衰老的机制之一
关键词内苁蓉；松果菊苷；表老；超氧化物歧化酶
中图分类号：R282文献标志码：A文章编号：1001-2494（2011）14-1077-04
肉苁蓉（Heba Cisanchg为常用的传统补益中药，在历代抗老防衰类方剂中仅次于人参占第2位。松果菊苷（echnacoside ECH是肉苁蓉中苯乙醇总苷的主要成分，近年研究表明，ECH具有神经保护，抗炎、促进伤口愈合和保肝”等作用。本实验建立衰老小鼠模型，观察HCH对各衰老相关指标的影响，研究ECH对衰老大鼠延缓衰老的作用及其机制，为进一步开发利用ECH提供实验依据。
1实验材料
1.1实验动物
3月龄IR小鼠，清洁级，26～32号雌雄各半［扬州大学实验动物中心，生产许可证：SCNK（苏）2002-0009使用许可证：SYXK（苏）2002-0045］，动物于实验前适应环境饲养1周，控制室温20～22℃.给予充足的标准饲料和饮用水，光照充足，实验过程符合相关动物伦理学要求。
1.2药物与试剂
ECH（纯度＞90％，棕色粉末，蒸馏水溶解）（和田帝辰沙生药物开发有限公司）；维生素 E淡黄色透明胶丸，食用油溶解，上海东海制药股份有限公司，批号：090102）；D半乳糖（D-gajaciose D-Gal BioBast n公司，批号：GS0417B2091）；考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒（批号：20090924）、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒（批号：20090916）、丙二醛（MDA）试剂盒（批号：20091009），NO（批号：20090814）、11-2L6 ELEA试剂盒（批号：20091124），均购自南京建成生物工程研究所；其他所用试剂均为国产分析纯。
1.3仪器
722型紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）：ELX8ooUV酶标仪（美国BiaTk公司）：PT-MR3100D组织匀浆机（瑞士Popuom公司）：MODEL．550台式冷冻离心机（德国EPPenddor公司）：BH10S型电子天平（德国Sanorins公司）。
2实验方法
2.1动物分组、模型制备及给药
取CR小鼠．随机分成6组．即正常对照组，衰老模型组，维生素F阳性对照组ECH20．40和60mg．k组，每组36只，雌雄各半，除正常组外，各组按文献1方法制备衰老小鼠模型，注射用水配置10％DG小鼠颈背部皮下注射10mL·kg，正常组小鼠相应注射等体积注射用水，每天1次，连续8周，同时，正常对照组和衰老模型组每天灌胃生理盐水，容量为20mL·kg，对照组每天灌胃等体积食用油溶解的维生素E其余3组每天灌胃等体积的20 40和60 mgkg＇ECH
2.2 ECH对小鼠的抗应激的作用
2.2.1耐缺氧实验 取250 ml广口磨口瓶若干只，瓶内放置钠石灰10多以吸收二氧化碳和水蒸气，每组取12只小鼠，雌雄各半，分别放入备用的广口瓶内，每瓶一只，在常温常压下，将涂有凡士林的磨口瓶瓶盖严密封紧，自封紧瓶口开始计时，直至呼吸停止，用秒表记录每只小鼠的存活时间。
2.2.2小鼠负重游泳实验 末次给药24 h后，每组取小鼠12只，给小鼠尾部负重其体重5％的重物，放入水温25℃，水深30m游泳测试箱中，以小鼠头部沉入水面下超过10的时间为标准，记录各组动物游泳时间。
2.3小鼠脏器指数的测定
末次给药24 h后，每组取小鼠12只，称体重，摘眼球取血，然后断椎处死，解剖取其胸腺和脾脏，分别称重，计算脾指数和胸腺指数，胸腺指数＝胸腺质量（m号／身体质量（10％：脾脏指数＝脾脏质量（mg／身体质量（10号。
2.4血清L-2和IL6水平的测定
摘眼球取血后，室温放置1b离心（3000 Fmir．10 min分离血清，根据试剂盒使用说明书操作，在酶标仪450 m处检测各组小鼠血清中1-2和IL-6的水平。
2.5脑组织中NO SOD和MDA的测定
末次给药24 h后，取出胸腺和脾脏后断头处理
小鼠，迅速剥离出脑（除掉小脑），称重后，用冷生理盐水制成10％组织匀浆，按试剂盒要求严格操作。NO测定采用硝酸还原酶法，SOD采用黄嘌呤氧化酶比色法，MDA用硫代巴比妥酸法。
2.6统计学处理
多组间比较用单因素方差分析，各组间用配对！检验，P＜0.05为统计学上有意义，所有计数资料采用均数 士标准差（）表示，采用SPS软件通过Pean法进行相关分析。
3实验结果
3.1 ECH对小鼠抗应激能力的影响
衰老模型组连续给D-Gal8周后，毛色逐渐枯槁没光泽，易脱落、皮肤弹性差，精神萎靡，倦怠嗜睡，群体喜扎堆，进食明显减少，体质量增加缓慢，呈现出明显衰老体征。与正常对照组相比，衰老模型组耐缺氧时间明显缩短，结果显著（R＜0.01）：ECH组显著改善衰老小鼠的耐缺氧时间，统计结果有差异（R＜0.0L P＜0.05）．与模型组小鼠相比，ECH可延长衰老小鼠游泳时间，低剂量组有差异（P＜0.05）．高剂量组差异显著（R＜0.01），雌雄各组间数据无差异，结果见表1
3.2 ECH对小鼠脏器指数的影响
胸腺和脾脏是机体主要的免疫器官，免疫器官指数可反映免疫器官的发育和免疫细胞的功能状态，间接反映了机体的免疫水平，实验结果显示，ECH能促进衰老小鼠胸腺和脾脏重量的增加，与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.01P＜0.05）．雌雄各组间数据无差异，结果见表2
3.3 EXCH对衰老小鼠血清1-2L-6含量的影响与正常对照组比较，模型组小鼠血清11-2含量
表1 EXCH对小鼠抗应激能力的影响，n＝12±”
Tah 1 EffcrofECH on te ansstess biav of aggg mjce n=12%±*
Gop |
300x1 |
ade4ss |
Swpmge ne |
?T |
wu/ |
||
Nomal |
2.9±379) |
40.69±2.679 |
|
DG4 |
21.7±419) |
21.92±3.85= |
|
HH |
21.71±38户 |
29.47±.369 |
|
0 |
(ビET |
32.67±5,429 |
|
0 |
30.90±309) |
36.3135.139 |
|
VE |
30.5±536) |
37.7815,469 |
wihD.Gajmddgoup
明显降低，血清1-6含量明显升高，有显著性差异（P＜0 05）：EOH各组能剂量依赖性升高血清1-2含量．降低L6含量，与衰老模型组比较，有显著性差异（P＜0.05）．雌雄各组间数据无差异，结果见表3．
3.4 ECH对衰老小鼠脑组织中NOQ SOD MDA的影响
与正常对照组小鼠相比，衰老模型组小鼠脑组织中的NO含量、SOD活性明显降低，而MDA含量则明显高于正常对照组，在统计学上差异显著（P＜0.01），给药后各组脑组织NO含量、SOD活性和MDA含量与正常对照组相比差异不显著，与衰老模型组相比，差异显著（P＜0.01 P＜0.05）．雌雄各组间数据无差异。结果见表4
4讨论
免疫系统作为一个完整的，自主的系统在维护和调整生命活动中起着重要作用，免疫功能下降是衰老最突出的特征，胸腺、脾脏是动物体内主要的免疫器官，免疫器官的重量是反应机体非特异性免
表2 ECH对小鼠脏器指数的影响，12±
Tab 2 Effct ofEXH on the vicem] ndex ofagjng mjoe T＃干x21
Gmp |
Dome |
THns서x |
Phe ndes |
真 |
.8t! |
I81 |
|
Nomal |
3059±2.0 |
59.55±3.44 |
|
DLRAI |
1960±3.94 |
30.02±43 |
|
1 |
20 |
23.22±3.793 |
2.35±1.799 |
25.58±3.74 |
5.62±4.279 |
||
60 |
2890±3.48* |
8. 14±4.59) |
|
VE |
29.85±2.17 |
30.42±2.89) |
注，与正常对照比，2）RC0.01与视型组比，＜0.05FC0.01
表3 ECH对血清L-2 1-6含量的影响，R＝12Tab:3 Effct ofECH on conens of pertukh-2(L-2) and tekukn6(1-6)a8gmn=12*±
Grap |
Dme |
12 |
표6 |
LA |
/ m-1 |
1-7 / |
|
Nome |
3 8930371) |
84.15±4.20% |
|
18지 |
1.60±0 447) |
目0901137 |
|
103 |
2.05±0 582) |
302.07±10089 |
|
〒 |
2 59±064 |
98.78±7.96* |
|
60 |
312±062 |
92.78±8.88 |
|
3A |
40 |
3 30±0.619 |
89.6136.339 |
注：与正常对照比，2RC0.01与型组比3，PC0 05 1）RC0.01
表4 ECH对脑组织NO．SOO MDA含量的影响，n＝12＊±Tab:4 EffetofECH on he NO SOD and MDA contensbe bap ssue ofagjngmjce n=12 X±8
GRp |
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