摘 要:目的 选择肉苁蓉最佳提取工艺参数,研究不同干燥方式对5种苯乙醇苷类成分的影响。方法 采用单因素筛选结合Box-Behnken响应面法优化提取工艺。最优条件提取后,利用HPLC法检测不同干燥方式肉苁蓉的松果菊苷、肉苁蓉苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2′-乙酰基毛蕊花糖苷成分含量并采用单因素方差分析、聚类分析、主成分分析、密切值法分析5种苯乙醇苷类成分含量,选择最佳干燥方式。结果 最佳提取工艺:甲醇体积分数55.14%,液料比46.39,提取时间38.50 min。聚类分析、主成分分析、密切值法分析表明,采用冷冻干燥法所得到的肉苁蓉品质最好,80 ℃烘干次之,40 ℃烘干最低。结论 使用该工艺提取肉苁蓉,其5种苯乙醇苷类成分提取完全、充分。虽然冷冻干燥法炮制肉苁蓉所保留有效成分最高,但从生产角度考虑,采用80 ℃烘干法炮制能达到成本和功效的平衡。肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y. C. Ma或德赢vwin登录
Cistanche tubulosa (Schenk) Wight干燥带鳞叶肉质茎[1]。肉苁蓉主要活性成分为苯乙醇苷类[2-4],药理研究表明其具有壮阳、提高免疫力、增强记忆等功能[4-9]。近年来,响应面法得以在中药提取中得到广泛应用[10-14]。响应面法具有检测精确度高、实验所需次数少、能准确预测函数模型、能反映因素和预测值之间关系等先天的优点[15-17]。因此,本实验将5种苯乙醇苷类成分含量的综合评分作为响应值,使用Design-Expert 8.0.6.1软件设计实验,优化肉苁蓉的提取工艺,为肉苁蓉的鉴定和质量标准建立提供参考。目前,指标性成分松果菊苷和毛蕊花糖苷为肉苁蓉提取、炮制工艺的研究热点,且《中国药典》2015年版规定肉苁蓉加工方法为“除去杂质,洗净,润透,切厚片,干燥”[1],对于干燥的方式没有明确规定。因此,本实验采用晒干、阴干、烘干(40、60、80、100、120 ℃)、冷冻干燥8种不同干燥方式对肉苁蓉进行炮制[18],为肉苁蓉干燥工艺提供理论指导。1 材料与仪器鲜品肉苁蓉采收于2018年10月,产地为甘肃省白银市民勤县糜滩乡,经甘肃农业大学郭晔红副教授鉴定为肉苁蓉Cistanche deserticola Y. C. Ma带鳞叶的肉质茎。对照品松果菊苷(批号82854-37-3,质量分数≥98%)、肉苁蓉苷A(批号93236-42-1,质量分数≥95%)、毛蕊花糖苷(批号61276-17-3,质量分数≥98%)、异毛蕊花糖苷(批号61303-13-7,质量分数≥98%)、2′-乙酰基毛蕊花糖苷(批号94492-24-7,质量分数≥95%)均购于成都普菲德生物技术有限公司;甲酸、甲醇为色谱纯,德国Merck公司;水为纯净水,其他试剂均为分析纯。Waters Acquity液相色谱仪,PDA检测器,Empower色谱工作站及四元溶剂管理系统;KQ-100E超声波清洗器,昆山市超声仪器有限公司;AL104分析天平,梅特勒-托利多仪器有限公司;LyoQuest-85冷冻干燥机,西班牙泰事达公司。2 方法与结果2.1 对照品溶液的制备精密称定松果菊苷、肉苁蓉苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2′-乙酰基毛蕊花糖苷对照品适量,加70%甲醇制成质量浓度分别为1.04、0.61、0.63、0.39、0.48 mg/mL的混合对照品溶液。2.2 肉苁蓉的色谱条件Waters Symmetry C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);柱温30 ℃,体积流量1.0 mL/min;流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液,洗脱梯度:0~12 min,29%~34%甲醇;12~40 min,34%~40%甲醇;30~35 min,40%~35%甲醇;35~40 min,30%甲醇;检测波长330 nm(图1)。2.3 供试品溶液的制备精密称取1 g烘干的肉苁蓉粉末于三角烧瓶中(过65目筛),加50%甲醇50 mL,称质量,40 kHz超声150 W,冷却室温,补足质量,即得。2.4 线性关系考察取上述混合对照品溶液0.1、0.5、1、2、4、8mL置10 mL量瓶中,加70%甲醇至刻度。精密吸取10 μL,按“2.2”项色谱条件测定,质量浓度为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),进行线性回归,得回归方程分别为松果菊苷Y=128 049 X-830 189,r=0.999 5,线性范围10.4~832.0 μg/mL;肉苁蓉苷A Y=87 980 X-416 764,r=0.999 9,线性范围6.1~488.0 μg/mL;毛蕊花糖苷Y=92 831 X-447 963, r=0.9998,线性范围6.3~504.0 μg/mL;异毛蕊花糖苷Y=92 831 X-447 963,r=0.999 2,线性范围3.9~312 μg/mL;2′-乙酰基毛蕊花糖苷Y=79 207 X-304 428,r=0.999 4,线性范围4.8~384.0 μg/mL。2.5 方法学考察2.5.1 精密度考察 取“2.1”项混合对照品溶液20 μL,连续进样6次,测定松果菊苷、肉苁蓉苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2′-乙酰基毛蕊花糖苷峰面积,RSD分别为0.23%、0.71%、0.59%、0.41%、0.29%,表明仪器精密度良好。2.5.2 重复性试验 取同一肉苁蓉样品6份,按“2.3”项制备供试品溶液,“2.2”项色谱条件进样,测定峰面积。结果松果菊苷、肉苁蓉苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2′-乙酰基毛蕊花糖苷质量分数的平均值分别为1.83%、0.21%、2.34%、0.13%、0.68%,RSD分别为1.32%、0.83%、1.24%、2.19%、0.78%,说明方法重复性较好。2.5.3 稳定性试验 于0、2、4、8、12、24、48 h测定同一份供试品溶液(按“2.3<span style="margin: 0px; padding